BCYE Agar sin Cisteína para Legionella

Aplicaciones principales

• Confirmación diagnóstica de Legionella mediante comparación de crecimiento en medios con y sin cisteína.
• Control de calidad del agua potable, sanitaria, industrial, termal y recreativa.
• Monitoreo ambiental en piscinas, jacuzzis, fuentes ornamentales y sistemas de refrigeración.
• Vigilancia en hospitales, clínicas dentales y torres de enfriamiento.
• Investigación microbiológica de requerimientos nutricionales y diferenciación de especies.
• Cumplimiento con estándares ISO y normativas para la detección de Legionella.

Especificaciones técnicas

• Tipo de medio: No selectivo para confirmación de Legionella spp. y L. pneumophila
• Composición por litro:
• Extracto de levadura: 10 g
• Carbón activado: 2-3.5 g
• Tampón ACES: 10 g
• Alfa-cetoglutarato potásico: 1 g
• Pirofosfato férrico: 0.25 g
• Agar bacteriológico: 12-13 g
• Agua destilada: 960 ml
• pH: 6.9 ± 0.2 (a 25°C)
• Apariencia: Negro azabache, opaco (placas preparadas)
• Almacenamiento placas: 2-8°C en lugar oscuro (vida útil: hasta 26 semanas)
• Almacenamiento liofilizado: 2-25°C (vida útil: hasta 36 meses)
• Incubación: 36 ± 1°C en atmósfera aerobia húmeda, 48-240 h (2-10 días), opcional 2.5% CO₂
• Control de esterilidad: Sin crecimiento microbiano ≥72h @ 25±1°C y 36±1°C
• Control biológico selectividad: E. coli CIP106878: sin crecimiento (10⁴-10⁵ UFC)
• Control biológico especificidad: L. pneumophila ATCC 33152 y 33156: sin crecimiento (<10.000 UFC)
• Normativas: ISO 11731:2017, EN ISO 11133:2014/A1:2018, EN ISO 11133:2020, NF T90-431 (2017)

Instrucciones de preparación y uso

1. Preparación de muestra: Procesar las muestras de agua conforme a la ISO 11731:2017; puede implicar filtración por membrana, tratamiento térmico (30±2 min @ 50°C) o ácido (1:9 muestra:tampón ácido).
2. Inoculación: Subcultivar al menos 5 colonias sospechosas en paralelo en dos placas: una con L-cisteína y otra sin L-cisteína. Si hay varias morfologías, seleccionar mínimo 2 de cada tipo.
3. Incubación: Incubar a 36±1°C en atmósfera húmeda aerobia durante un mínimo de 48 horas. Revisar a los 2-4 días y, de ser necesario, prolongar hasta 10 días, examinando periódicamente.
4. Lectura e interpretación: Confirmación presuntiva de Legionella si hay crecimiento solo en el medio con L-cisteína y ausencia total en el medio sin cisteína. Complementar con pruebas de aglutinación con látex y fluorescencia si es necesario.

Beneficios clave del medio BCYE sin cisteína

• Permite confirmación presuntiva específica de Legionella.
• Mejora la fiabilidad diagnóstica al comparar con y sin cisteína.
• Cumple con normativas internacionales ISO y EN.
• Facilita procedimientos de control y vigilancia ambiental.

Preguntas frecuentes

¿Por qué es necesario utilizar un BCYE sin cisteína en la confirmación de Legionella?

La ausencia de L-cisteína impide el crecimiento de Legionella, permitiendo diferenciarla de otras bacterias no dependientes de este aminoácido y confirmando su presencia.

¿Qué diferencia hay entre el BCYE estándar y el BCYE sin cisteína?

El BCYE estándar contiene L-cisteína y soporta el crecimiento de Legionella; el BCYE sin cisteína no lo permite, funcionando como control negativo para la confirmación presuntiva.

¿Cuánto tiempo se debe incubar el medio para obtener resultados fiables?

Se recomienda incubar entre 48 y 240 horas (2-10 días), revisando a los 2, 3 y 5 días. Algunos aislamientos pueden requerir hasta 10 días.

¿Qué controles de calidad se aplican a este medio?

Se realizan controles de esterilidad y de rendimiento biológico empleando cepas de referencia como E. coli y L. pneumophila para asegurar la selectividad y especificidad del medio.

¿Qué fabricantes ofrecen BCYE sin cisteína?

Fabricantes reconocidos incluyen Bio-Rad, Scharlab, Oxoid (Thermo Fisher Scientific), A.B.E. y Biokar Diagnostics, con diferentes presentaciones y códigos disponibles.